引言

生殖器疱疹是一种由1型或2型单纯疱疹病毒引起的复发性、通常疼痛的性传播疾病。全球约有4.91亿49岁以下人群感染HSV-2，并且相对于男性，女性更容易感染HSV-2。为了应对这一疾病难题，科研界正持续探索新的防治策略。2025年3月，美国加州大学欧文分校医学院研究团队联合TechImmune, LLC公司在《Frontiers in Immunology》上发表了一篇关于在HSV-2潜伏感染豚鼠模型中，重组腺病毒疫苗rAd-RR2和rAd-gD能有效诱导背根神经节与阴道黏膜中高频率的IFN-γ+ CD4+/CD8+组织驻留记忆T细胞，显著降低病毒脱落及生殖器疱疹病变程度，从而防止疱疹复发的研究。

用表达RR2和gD的腺病毒5型对HSV-2感染豚鼠进行治疗性免疫可预防复发性生殖器疾病

在HSV-2感染豚鼠模型中，研究团队比较了五种腺病毒疫苗（rAd-RR2、rAd-RR1、rAd-gD、rAd-VP22、rAd-VP16）的治疗效果。结果显示，与模拟接种组相比，所有疫苗均显著降低累积阴道病变和复发天数，其中rAd-RR2和rAd-gD效果最优，其DRG和VM组织中HSV-2 DNA拷贝数最低，生殖器病变评分显著改善，保护效果与阳性对照dl529相当。其他疫苗组呈中等保护，而模拟组无显著保护作用。

图1.五种基于腺病毒的候选疫苗对HSV-2感染豚鼠进行治疗性免疫后抗生殖器疱疹感染的保护效果

用rAd-RR2、rAd-RR1和rAd-gD对HSV-2感染豚鼠进行治疗性疫苗接种增加了DRG和VM中组织驻留CD4⁺和CD8⁺T细胞的频率

在HSV-2感染豚鼠模型中，rAd-RR2、rAd-RR1和rAd-gD疫苗能显著提升背根神经节（DRG）中CD4+和CD8+T细胞频率；在阴道黏膜（VM）中，rAd-RR2可显著增加CD4+ T细胞，而rAd-RR2、rAd-VP22和rAd-VP16显著提升CD8+T细胞。脾脏中多数疫苗组均能增强CD4+和CD8+T细胞应答。结果表明rAd-RR2与rAd-gD在诱导局部组织驻留T细胞方面效果尤为突出。

图2.五种基于腺病毒的候选疫苗对HSV-2感染豚鼠进行治疗性免疫后抗体的形成

用rAd-RR2、rAd-RR1和rAd-gD对HSV-2感染豚鼠进行治疗性疫苗接种增强了DRG和VM中的记忆T细胞

研究团队通过流式细胞术分析HSV-2感染豚鼠的背根神经节和阴道黏膜组织，发现所有腺病毒疫苗组（rAd-RR2、rAd-RR1、rAd-gD、rAd-VP22、rAd-VP16）均能显著提高DRG中CD4⁺CD44⁺和CD8⁺CD44⁺记忆T细胞的频率。而在VM中，仅rAd-RR2、rAd-RR1和rAd-gD疫苗可增强CD8⁺CD44⁺ T细胞。CD44⁺T细胞的增加与疫苗诱导的长期适应性免疫保护效果密切相关。

图3.五种基于腺病毒的候选疫苗对HSV-2感染豚鼠进行治疗性免疫后，其背根神经节和阴道黏膜中CD8⁺CD103⁺ T细胞与CD8⁺CRTAM T细胞频率增加

用rAd-抗原对HSV-2感染豚鼠进行治疗性疫苗接种有效增强了DRG和VM中的组织驻留记忆

进一步分析显示，在DRG中，rAd-RR2、rAd-RR1、rAd-gD和rAd-VP22疫苗能显著提升CD8⁺CD103⁺组织驻留记忆T细胞的频率；但在VM中，仅rAd-RR2和rAd-gD表现出此效果。CD103作为驻留记忆标志蛋白，通过结合E-钙黏蛋白促进T细胞在上皮内滞留，从而在病毒再激活时触发快速局部免疫反应。rAd-RR2和rAd-gD诱导的CD103⁺ T细胞优势与其显著降低病毒脱落和病变严重度的保护功效相关。

图4.五种基于腺病毒的候选疫苗对HSV-2感染豚鼠进行治疗性免疫后，其背根神经节和阴道黏膜中CD4⁺Ki-67 T细胞与CD8⁺Ki-67 T细胞频率增加

本文献中的研究证实，基于腺病毒载体的治疗性疫苗（尤其是rAd-RR2和rAd-gD）能通过诱导阴道黏膜和背根神经节中组织驻留记忆T细胞（TRM）的增殖与活化，显著降低HSV-2潜伏感染豚鼠的病毒脱落和生殖器病变复发频率。其保护效果与激活CD4⁺/CD8⁺ T细胞免疫应答密切相关，且效果优于部分传统亚单位疫苗。这些发现为开发针对复发性生殖器疱疹的黏膜疫苗提供了关键理论基础和候选抗原策略。除了上述对于HSV-2疫苗研究免疫机制的揭示，建立可靠的HSV-2豚鼠感染-复发模型也是转化医学的关键桥梁。

「DIFF CRO」HSV-2豚鼠感染-复发模型

豚鼠模型在抗HSV-2病毒药物和疫苗研发中的不可替代性：

豚鼠模型是抗HSV-2研发中不可替代的金标准，因其能完整模拟人类生殖器疱疹自然史，生殖结构与人类高度相似：感染后可在背根神经节建立潜伏，并自发出现周期性复发及无症状排毒。该模型提供多维量化终点，可同步评估药物或疫苗对急性症状、复发及潜伏感染的综合效果。但建立稳定、可重复的豚鼠感染模型具有挑战性。而构建能再现自发性周期性复发的模型则更为困难，其涉及复杂的免疫与神经调控机制，对实验设计与长期监测要求极高。

表1.豚鼠模型与其他模型的比较优势

「DIFF CRO」的HSV-2豚鼠急性感染模型评价服务

「DIFF CRO」采用豚鼠进行HSV-2动物攻毒可产生明显的体重变化（图5）与病变（图6），根据实际症状，设置了相应的评分标准，具体的案例模型评分如下（图7）：

· 1分：1-2个明显的病变

· 2分：＞2的病变

· 3分：融合病灶

· 4分：溃疡病变

图5. HSV-2豚鼠攻毒体重变化（不同剂量攻毒）

图7. HSV-2豚鼠攻毒模型案例评分

「DIFF CRO」的HSV-2豚鼠复发模型评价服务：

建立HSV-2复发模型的研究中，我司选用Hartley豚鼠进行实验。通过设置不同剂量攻毒组，观察到各组的病变表现及体重变化呈现明显差异，体现了模型良好的剂量反应关系。在为期31天的观察期内，已观察到编号为2-1的豚鼠发生2次复发，进一步验证了该模型可有效模拟人类HSV-2感染的复发现象。

图8.基于Hartley豚鼠的HSV-2感染复发模型建立(G2攻毒组:1*10 PFU/只)

· 1分：1-2个明显的病变

· 2分：＞2的病变

· 3分：融合病灶

· 4分：溃疡病变

图9.HSV-2豚鼠复发模型体重变化情况

服务内容

毒株信息

「DIFF CRO」HSV中和抗体检测平台

在体内，中和抗体（nAb）可以通过多种机制介导抗病毒功能，包括中和作用和抗体效应功能，可用于指导病毒疫苗设计，或作为抗病毒药物用于预防和治疗病毒性疾病中。DIFF CRO服务平台可针对HSV疫苗及药物进行评价，提供基于细胞病变效应法（Cytopathic Effect, CPE）的HSV中和抗体检测服务（图10）。

图10. HSV中和抗体检测流程图

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「DIFF CRO」CPE法优势：

服务案例：

图12.Pritelivir对HSV-1(KOS)以及HSV-2（MS）体外细胞抑制活性检测结果

服务内容

毒株信息

在抗HSV药物与疫苗的研发进程中，临床前模型的可靠性与预测价值至关重要。「DIFF CRO」凭借领先的HSV药效评价平台，特别是以可稳定构建HSV-2豚鼠感染-复发模型为核心优势，为创新疗法提供关键支撑。我们具备行业稀缺的动物模型能力——成功建立可模拟“急性感染-潜伏建立-自发复发”全周期的豚鼠金标准模型。依托自有毒株库与专业团队，DIFF CRO致力于为全球研发者提供从体外筛选到体内药效验证的一站式CRO解决方案，显著加速HSV药物疫苗的临床转化进程。

参考文献：

Quadiri A, Prakash S, Dhanushkodi NR, et al. Therapeutic prime/pull vaccination of HSV-2-infected guinea pigs with the ribonucleotide reductase 2 (RR2) protein and CXCL11 chemokine boosts antiviral local tissue-resident and effector memory CD4+ and CD8+ T cells and protects against recurrent genital herpes. J Virol. 2024 May 14;98(5):e0159623.